Prošle su dve godine otkako je Piter Parker (Tobi
Megvajer) napustio svoju dugogodišnju ljubav - Meri Džejn Votson (Kirsten Danst), i preuzeo odgovornost kao Spajdermen. On mora da se suoči sa novim izazovima i da se izbori sa svojim darom ili, možda, prokletstvom. Piter mora da iznese svoj dvojni identitet - kao superheroj Spajdermen i kao običan student. Prijateljstva koja su mu veoma važna dovedena su u opasnost zbog njegovog sukoba sa moćnim zločincem doktorom Oktopusom - dok Oks (Alfred Molina). U međuvremenu, Meri Džejn nastavlja svoj život. Posvetila se glumi i ima novu ljubav. Piterov najbolji drug, Hari Osborn (Džejms Franko), želi da se osveti Spajdermenu, smatrajući ga odgovornim za smrt svog oca. Piterov život postaje još komplikovaniji kada se pojavi novi neprijatelj, dr Oto Oktavius (Molina) - dok Oks. On mora da prihvati sudbinu i da iskoristi svoj talenat.